亚洲欧洲综合色视在线-老司机深夜福利在线免费观看-一区二区三区熟女中文字幕-国产美女与老外做爰视频免费

您現(xiàn)在的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 基因擴(kuò)增儀原理分析及常見(jiàn)的幾種介紹

基因擴(kuò)增儀原理分析及常見(jiàn)的幾種介紹

  • 發(fā)布日期:2018-12-24      瀏覽次數(shù):1876
    •   基因擴(kuò)增儀原理分析及常見(jiàn)的幾種介紹
        基因擴(kuò)增儀(PCR儀)技術(shù)原理:
        標(biāo)記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后,完成高溫變性,低溫復(fù)性,適溫延伸的熱循環(huán),并遵守聚合酶鏈反應(yīng)規(guī)律,與模板DNA互補(bǔ)配對(duì)的Taqman探針被切斷,熒光素游離于反應(yīng)體系中,在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光,隨著循環(huán)次數(shù)的增加,被擴(kuò)增的目的基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長(zhǎng),通過(guò)實(shí)時(shí)檢測(cè)與之對(duì)應(yīng)的隨擴(kuò)增而變化熒光信號(hào)強(qiáng)度,求得CT值,同時(shí)利用數(shù)個(gè)已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照,即可得出待測(cè)標(biāo)本目的基因的拷貝數(shù)。
        幾種常用PCR基因擴(kuò)增儀的用途及介紹
        普通PCR儀
        一般把一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運(yùn)行。主要是用作簡(jiǎn)單的,對(duì)目的基因退火溫度的擴(kuò)增。
        主要應(yīng)用于科研、教學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)、檢疫等。
        梯度PCR儀
        一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱之為梯度PCR儀。因?yàn)楸粩U(kuò)增的不同的DNApian段其適合的退火溫度不同,通過(guò)設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增,從而一次性PCR擴(kuò)增就可以篩選出表達(dá)量高的適合退火溫度進(jìn)行有效的擴(kuò)增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,這樣既節(jié)約時(shí)間,也節(jié)約經(jīng)費(fèi)。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用。正真的梯度,是每一排管都有的加熱控溫探頭,2009年為止只有美國(guó)ABI公司可以做到。其他的都是從兩頭的熱傳遞來(lái)設(shè)計(jì)控溫。
        梯度PCR儀多應(yīng)用于科研、教學(xué)機(jī)構(gòu)。
        實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀
        在普通PCR儀設(shè)計(jì)基礎(chǔ)上增加熒光信號(hào)激發(fā)和采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),形成了具有熒光定量PCR功能的儀器。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR擴(kuò)增原理相同,在PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過(guò)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。
        熒光定量PCR儀有單通道,雙通道和多通道之分。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時(shí)候,選用單通道;有多種熒光標(biāo)記的時(shí)候使用多通道。單通道也可以檢測(cè)多熒光的標(biāo)記和目的基因表達(dá)產(chǎn)物,因?yàn)橐淮沃荒軝z測(cè)一種目的基因的擴(kuò)增量,需多次擴(kuò)增才能檢測(cè)完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR,實(shí)現(xiàn)一次檢測(cè)多種目的基因的功能。
        實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀主要應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè)、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等。
        原位PCR儀
       ?。ㄓ行┢放频腜CR儀具有普通PCR、梯度PCR、原位PCR的功能,通過(guò)替換模塊進(jìn)行多用途開(kāi)展實(shí)驗(yàn)工作)
        是用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細(xì)胞內(nèi)基因擴(kuò)增儀。如病原基因在細(xì)胞的位置或目的基因在細(xì)胞內(nèi)的作用位置等??杀3旨?xì)胞或組織的完整性,使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細(xì)胞中,在細(xì)胞的靶DNA所在的位置進(jìn)行基因擴(kuò)增。不但可以檢測(cè)到靶DNA,還能標(biāo)出靶序列在細(xì)胞內(nèi)的位置。于分子和細(xì)胞水平上研究疾病的發(fā)病機(jī)理和臨床過(guò)程及病理的轉(zhuǎn)變有著重大的實(shí)用價(jià)值。
    黎川县| 高陵县| 灵璧县| 霍城县| 塘沽区| 孝昌县| 宜君县| 偏关县| 中宁县| 三亚市| 容城县| 纳雍县| 三河市| 渝中区| 开封县| 阳东县| 普宁市| 佛冈县| 浮梁县| 仙桃市| 永宁县| 浮山县| 千阳县| 临邑县| 漳平市| 天水市| 上虞市| 白水县| 濮阳市| 聂拉木县| 凭祥市| 若尔盖县| 两当县| 彰化市| 高台县| 正镶白旗| 外汇| 宜丰县| 彭州市| 肇州县| 青阳县|