三鹿事件:三聚氰胺檢測方法匯總
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三鹿奶粉事件沸沸揚揚,各地致病患兒的致命成分——三聚氰胺檢測方法匯總
檢測方法
u GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺
u Spectra-Quad實現(xiàn)三聚氰胺含量在線檢測
u 超液相色譜_電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測定飼料中殘留的三聚氰胺
u 反相液相色譜法測定飼料中三聚氰胺的含量
u 液相色譜-二極管陣列法測定高蛋白食品中的三聚氰胺
u 液相色譜法(HPLC)測定飼料中三聚氰胺的含量
u 液相色譜-四極桿質(zhì)譜聯(lián)用測定飼料中三聚氰胺含量
u 固相萃取與液相色譜聯(lián)用測定寵物食品中三聚氰胺
u 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MSMS)分析寵物食品中三聚氰胺
u 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定飼料中三聚氰胺殘留
u GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺
附:三聚氰胺檢測方法示例
儀器與條件
u 液相色譜儀;二極管陣列檢測器(DAD),檢測波長240nm,柱溫:40℃。
(一)AgelaVenusilTMASBC18(4.6×250mm);緩沖液:10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉;流動相:緩沖溶液:乙腈=85:15;流速:1.0mL/min。
(二)AgelaVenusilTMASBC8(4.6×250mm);流動相:緩沖液:乙腈=85:15;緩沖液:10mM檸檬酸,10mM辛烷磺酸鈉,調(diào)pH為3.0;流速:1.0mL/min;
u 離子交換固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX
試劑與樣品
寵物飼料樣品(農(nóng)業(yè)部飼料供應(yīng)中心提供);甲醇、乙腈為北京艾杰爾科技有限公司提供;氨水、乙酸鉛、三氯乙酸、均購于北京化學(xué)試劑公司;三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品、檸檬酸、辛烷磺酸鈉(Sigma公司);甲醇為色譜純,其他均為化學(xué)純。
實驗方法
1、樣品前處理方法
(1)標(biāo)準(zhǔn)樣品配制:取50mg三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品,以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的標(biāo)準(zhǔn)溶液,使用時,以提取液(0.1%三氯乙酸)稀釋至所要的濃度。
(2)提?。悍Q取飼料樣品5g,加入50ml0.1%三氯乙酸提取液,充分混勻,加入2mL2%乙酸鉛溶液,超聲20min。然后取部分溶液轉(zhuǎn)移至10mL離心管中,8000rpm/min離心10min,取上清液3mL過混合型陽離子交換小柱(PCX)。
(3)凈化(PCX小柱,60mg/3mL):
a)活化及平衡:3mL甲醇,3mL水
b)上樣:加入提取液3mL
c)淋洗:3mL水;3mL甲醇;棄去淋洗液并將小柱抽干。
d)洗脫:5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配制:5mL氨水+95mL甲醇)。
e)濃縮:50℃,氮氣吹干,20%甲醇/水定容至2mL,HPLC分析或衍生后GC/MS分析。
2、三聚氰胺被立案
2.1三聚氰胺HPLC-UV檢測方法
三聚氰胺是強(qiáng)極性化合物,在傳統(tǒng)的反相C18柱上保留很差,需要用離子對試劑色譜方法才能有良好的保留與分離,按照美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)的三聚氰胺檢測方法和中國農(nóng)業(yè)部公布的三聚氰胺檢測方法,采用艾杰爾(Agela)ASB系列親水色譜柱,可以得到良好的分離效果:
(a)色譜柱:VenusilASBC84.6×250mm;標(biāo)準(zhǔn):FDA方法;流動相:緩沖液:乙腈=85:15;緩沖液:10mM檸檬酸,10mM辛烷磺酸鈉,調(diào)pH為3.0;流速:1.0mL/min;柱溫:40oC;波長:240nm
(b)色譜柱:VenusilASB-C184.6×250mm;標(biāo)準(zhǔn):中國農(nóng)業(yè)部頒標(biāo)準(zhǔn)方法;緩沖液:10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉;流動相:緩沖溶液:乙腈=85:15;流速:1.0mL/min;柱溫:40℃;波長:240nm
空白加水平(mg/L)回收率0.01116%0.1108%0.592%296%
2.2三聚氰胺LC-MS檢測方法
由于FDA公布的HPLC-UV方法中,流動相添加了離子對試劑,因此限制了液質(zhì)聯(lián)用方法的使用;但不用離子對試劑色譜方法,三聚氰胺在傳統(tǒng)的C18柱上保留很差,不能得到較好的分離定量〔3〕。
基于此問題,艾杰爾科技公司自主開發(fā)了新的方法,采用艾杰爾(Agela)ASB系列親水色譜柱,不用離子對試劑也能得到有效的保留與分離。因此方法中流動相不含離子對試劑,可以用于質(zhì)譜檢測。
與FDA2007年4月公布的《UpdatedFCCDevelopmentalMelamineQuantitation(HPLC-UV)》相比較,該方法大大降低了zui低檢測限(MSD:0.5ppm;UV:2ppm),提高了檢測靈敏度。
以該方法分別在ASB-C84.6×250mmASB-C184.6×250mm得到很好的譜圖。
緩沖液:10mM的NH4AC;流動相:Buffer::ACN=95:5;流速:1.0mL/min;進(jìn)樣量:樣品先用70%ACN溶解成約1mg/mL,用ACN稀釋成0.1mg/mL,進(jìn)10uL;柱溫:40℃;波長:240nm
結(jié)果與討論
1、陽離子交換柱(PCX)
三聚氰胺呈弱堿性(弱陽離子化合物),凈化過程一般應(yīng)選擇陽離子交換柱。混合型的陽離子交換柱(PCX)通過將磺酸基團(tuán)(-SO3H)鍵合在極性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附劑上,具有陽離子交換和反相吸附兩種機(jī)理,并具有以下優(yōu)點:
a)可通過兩種不同溶液的洗滌(水/一定pH值的緩沖溶液和有機(jī)溶劑),使樣品更干凈,提高檢測的靈敏度。
b)批次重復(fù)性好。
c)回收率高,重現(xiàn)性好,即使小柱跑干也可以得到較高回收率。
2、LC-MS方法優(yōu)點:
(1)檢測過程簡便:無須添加離子對試劑,三聚氰胺就可得到良好的保留與分離,避免了配制離子對流動相的復(fù)雜過程。
(2)提高了檢測的靈敏度:無離子對試劑,可以用于質(zhì)譜檢測器,大大降低了zui低檢測限(MSD:0.5ppm;UV:2ppm)。
(3)降低了檢測成本:不用離子對試劑,就不再需要買價格較貴的離子對試劑了,從而降低了檢測成本。
(4)延長了色譜柱的使用壽命:避免了使用離子對試劑減少色譜柱壽命的影響。
(5)該方法所使用的色譜柱具有通用性:無論是用FDA方法、中國農(nóng)業(yè)部部頒標(biāo)準(zhǔn)方法和本公司開發(fā)的LC-MS方法,使用艾杰爾(Agela)ASB系列親水色譜柱均能得到一個很好的檢測結(jié)果,從而給客戶提供了多種選擇空間。
國家食品質(zhì)量監(jiān)督檢測中心有關(guān)人士說,在現(xiàn)有的國家標(biāo)準(zhǔn)奶粉檢測中,主要進(jìn)行蛋白質(zhì)、脂肪、細(xì)菌等檢測。三聚氰胺屬于化工原料,是不允許添加到食品中的,所以現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)不會包含相應(yīng)內(nèi)容。也就是說,三聚氰胺不屬于常規(guī)檢測項目,正常情況下,很少有人會想到去檢測它。